于海燕 李亮 马越 张亚楠
[摘要] 目的 本研究建立咬合創伤合并牙周致病菌条件下的牙周夹板复合实验性动物模型，观察大鼠磨牙牙周骨组织的变化规律，为（牙合）创伤与牙周炎的（牙合）治疗提供理论依据。 方法 雄性Wistar大鼠60只，随机分三组，单颗磨牙咬合创伤组（A组），牙周夹板磨牙咬合创伤组（B组），牙周夹板磨牙咬合创伤+牙周炎复合组（C组），每组各20只。（牙合）面粘接方丝建立咬合创伤模型，C组管饲P.g菌悬液。在建模0、14、28 d和在建模28 d时将各组刺激物去除后的14、28 d每组各随机处死4只大鼠，取下颌骨，HE染色，光学显微镜下观察组织学变化及破骨细胞总数。结果 经重复测量方差分析，3组破骨细胞平均数值进行组间比较和不同时间效应，差异有统计学意义（P<0.01）;单颗磨牙咬合创伤组（A组）与牙周夹板磨牙组（B组）比较，牙周组织损伤程度在咬合创伤时间方面比较，差异有统计学意义（P<0.01）;牙周夹板磨牙组（B组）与加入P.g菌形成复合因素损伤的C组实验模型比较，差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 应用牙周夹板可减轻（牙合）创伤导致的牙动度增加，阻止龈袋内的菌斑向根尖方向移行定植，减少牙槽骨的破坏。
[关键词] 咬合创伤;牙周夹板;牙周炎;牙槽骨
[中图分类号] R781.4 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2020）33-0030-03
[Abstract] Objective To establish a periodontal splint compound experimental animal model under the condition of occlusal trauma and periodontal pathogens， to observe the changes in the periodontal bone tissue of the molars in rats， and to provide a theoretical basis for the treatment of occlusal trauma and periodontitis. Methods A total of 60 male Wistar rats were randomly divided into three groups， single molar occlusal trauma（group A）， periodontal splint molar occlusal trauma group（group B）， periodontal splint molar occlusal trauma+periodontitis combined group（group C）， with 20 cases in each group. The occlusal surface was bonded with square wire to establish the occlusal trauma model. Group C was gavaged with P.g bacteria suspension. Four rats in each group were randomly killed at modeling 0， 14， 28 days and 14 and 28 days after the stimulation was removed. The stimuli were removed at 28 days after modeling. The mandibles were removed for HE staining. The histological changes and the total number of osteoclasts were observed under an optical microscope. Results After repeated measures analysis of variance， the average values of osteoclasts in the three groups were compared between the groups at different times， and the difference was statistically significant（P<0.01）. There was a significant difference in the degree of periodontal tissue damage in the time of occlusal trauma between the single molar occlusion group（group A） and the periodontal splint group（group B）（P<0.01）. There was no significant difference between periodontal splint molar group（group B） and （group C） with P.g bacteria added to form compound factor damage（P>0.05）. Conclusion The periodontal splint can reduce the increase in dental mobility caused by occlusal trauma， prevent the colonization of plaque in the gingival pocket towards the root tip， and reduce the damage of alveolar bone.
[Key words] Traumatic occlusion; Periodontal splint; Periodontitis; Alveolar bone
咬合创伤是牙周炎的常见合并症，随着牙周组织的持续破坏，牙齿开始出现松动、移位，变化的咬合状况进一步加重了牙周组织的破坏[1]。牙周炎是由牙菌斑中微生物引起的慢性感染性疾病，它受全身防御机制的调控和各种全身及局部因素的影响，其中过大的咬合力、异常的侧向力、早接触、牙齿排列异常等咬合问题均会加重牙周组织的破坏[2-4]。目前，（牙合）治疗的方式主要包括选磨法、牙周夹板、正畸治疗等。牙周夹板是将松动的患牙与健康稳固的邻牙连接，形成一个咀嚼群体从而分散牙合力，减轻患牙的负担，为牙周组织的修复和行使正常的功能创造条件[5-6]，但牙周夹板对牙周微环境的影响并不清晰。本研究建立咬合创伤合并牙周致病菌条件下的牙周夹板复合实验性动物模型，观察大鼠磨牙牙周骨组织的变化，为（牙合）创伤与牙周炎的（牙合）治疗提供理论依据，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 材料
SPF级雄性Wistar大鼠（辽宁长生生物技术有限公司）;牙龈卟啉单胞（Porphyromonas gingivalis，P.g）ATCC 33277、血琼脂培养基与牛-脑心浸液培养基（黑龙江省医院微生物实验室）;甲硝唑片（山东华鲁制药有限公司）;荧光正置显微镜（Leica，德国）。全自动微生物分析仪与全自动麦氏比浊仪（BD，美国）。
1.2 培养菌种
P.g菌接种在血琼脂培养基内，放于恒温箱培养1周，全自动微生物分析仪进行鉴定。将菌落在牛-脑心浸液培养基中增菌，麦氏比浊仪将浓度调节约1.0×109 CFU/mL，备用大鼠口内。
1.3 随机分组与模型建立
雄性Wistar大鼠60只（体重280～310 g），随机分三组，单颗磨牙咬合创伤组（A组），牙周夹板磨牙咬合创伤组（B组），牙周夹板磨牙咬合创伤+牙周炎复合组（C组），每组各20只。所有大鼠常规饲养7 d，给予甲硝唑溶液抑制口内菌，饮用3 d。实验大鼠分笼饲养3 d，水合氯醛（3 mL/kg）腹腔麻醉，A组在左下第一磨牙（牙合）面粘接方丝1～2 mm;B、C组左下三颗磨牙（牙合）面粘接方丝5～6 mm，（牙合）面均抬高0.6～0.8 mm，建立左下颌磨牙创伤模型。在C组左下三颗磨牙颈部结扎丝，同时管饲组内每只鼠1.5 mL培养48 h的P.g菌悬液，隔天补充一次，共3次，建立牙周炎及夹板施加创伤复合性模型。B、C组建模28 d时去除刺激物，在左下三颗磨牙颊侧（牙合）1/2处，粘接纤维夹板将下颌磨牙连成一整体。
1.4 标本采集与组织切片
选取0、14、28 d和在建模28 d时将各组刺激物去除后的14、28 d这5个时间点，每组大鼠各随机处死4只，取下颌骨，甲醛固定，甲酸脱钙，脱水，包埋及近远中切片厚约1.5 μm，HE染色，光镜下视野（200×倍数）计数破骨细胞总数作为主要观察指标，三次所得结果求平均值。
1.5 统计学方法
采用SAS9.1统计学软件进行数据处理。对各分组破骨细胞平均数值用均数±标准差（x±s）表示，进行不同时间与不同组间重复测量方差分析，P<0.05为差异有统计学意义，P<0.01为差异有高度统计学意义。
2 结果
2.1 三组临床观察
A、B组大鼠在整个实验期口腔牙周组织无异常变化。C组14 d结扎处牙龈红肿，探诊出血，可探及浅牙周袋;28 d探诊后出血量大，探及深牙周袋，C组整组磨牙颊舌侧松动度均超出1 mm;去除结扎刺激物后14、28 d探诊出血减轻，牙齿松动幅度小于1 mm。
2.2 三组显微镜下观察
14 d时观察牙周完整性发现A、B组牙周纤维部分断裂，C组牙周完整性被破坏;A、B组牙槽嵴与牙槽骨骨皮质不连续，牙槽骨破骨细胞明显增多;A组均重于B组。C组结合上皮明显根向迁移，牙槽嵴顶消失由纤维代替，牙槽骨骨皮质不连续且破骨细胞增多;28 d时A组部分牙槽嵴由纤维替代，破骨细胞减少，B组增多，两组骨吸收陷窝明显;C组炎细胞范围扩大，破骨细胞增多，去除刺激后14 d和28 d时，A、B组仍存在较多的破骨细胞，牙周组织内见新骨增生和大量的成纤维细胞，整个过程中结合上皮未向根方迁移。C组牙周组织炎症明显减轻，仍存较多的破骨细胞，去除刺激后28 d见成骨细胞与成纤维细胞增多。
2.3 三组各个时间点破骨细胞计数比较
光镜下破骨细胞数结果比较，统计发现时间效应和分组效应差异均有高度统计学意义（P<0.01）;单颗磨牙咬合创伤组（A组）与牙周夹板磨牙组（B组）比较，牙周组织损伤程度在咬合创伤时间方面比较，差异有统计学意义（P<0.01）;牙周夹板磨牙组（B组）与加入P.g菌形成复合因素损伤的C组实验模型比较，差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。
3 讨论
咬合创伤和牙周致病菌均是牙周组织损伤和破坏的诱因，两种危险因素叠加在一起引起的病理损害與损伤修复机制更为复杂[7]。动物研究和临床研究带来的不同研究结果使临床医生对于牙周病合并咬合创伤患者的治疗变得复杂而又矛盾。咬合创伤引起严重的炎症，进而诱导骨吸收[8]的观点越发受到关注。但也有一些调查[9]指出，外伤性（牙合）与牙周炎相关并需要实施牙周咬合调整治疗的证据并不很充分。目前，牙周夹板是控制临床牙松动常用且有效的方法，松动牙固定是通过固定夹板将松动牙连接固定在相邻的相对稳定的牙上，以形成一个新的咀嚼单位，当牙齿受到不同方向的咬合力时不会再像单一牙齿受到咬合创伤那样，每个牙齿各自受力而发生倾斜移位，而是由多个牙根的牙周膜纤维共同负担[10-11]。本研究综合国内外研究[12-14]建立咬合创伤模型，粘接牙周夹板（USA，美国）将下颌磨牙连成一个整体[15]建立牙周夹板模型，实验结果表明，本方法可建立稳定、可靠的大鼠复合实验模型。本研究结果显示，单纯咬合创伤因素的A组和B组，在实验期牙龈组织外观正常，而加入牙周致病菌的C组，14 d均出现典型牙周炎症状，28 d牙齿明显松动。单颗磨牙咬合创伤组（A组）与牙周夹板磨牙组（B组）比较，牙周组织损伤严重，这一结果证明牙周夹板避免了单颗牙牙周组织的应力集中，起到分散（牙合）力的作用。利用夹板的稳定性， 御近远中向的倾斜外力，牙松动被控制在生理范围之内。A、B两组观察整个过程中结合上皮未向根方迁移，提示牙周夹板的应用可以减轻牙周组织的损伤。而有P.g菌因素的C组结合上皮明显根向迁移，研究证明，咬合创伤和致病菌具有不同的牙周损伤和修复机制。
